血清酶测定试剂

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第四章血清酶测定试剂
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第四章
血清酶测定试剂
第一节血清丙氨酸氨基转移酶测定试剂
第二篇
一、概述
丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)是一种能够催化丙氨酸与-酮戊二酸
之间的氨基转移反应的转氨酶,主要存在于人体肝脏中,同时也广泛分布在心脏、肾脏、脾
脏、骨骼肌和肺等组织中。ALT主要分布在细胞质中,当肝细胞发生损伤或坏死时,细胞内
ALT由于浓度差的作用而被释放到血液中,使血清中的ALT含量增加。因此,血清中ALT升高
临床化学检测试剂
常出现于组织损伤早期,血清中的LT活性可作为评价肝细胞损伤敏感指标,尤其是病毒性肝
炎的重要指标。
二、检测技术与方法
目前,血清丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化
酶法和2,4-二硝基苯肼法等。其中,丙氨酸底物法为国际临床化学联合会(℉CC)推荐的改良
方法,是目前国际公认的ALT测定参考方法,也是用于ALT测定的体外诊断试剂采用的主流方
法,其检测原理如下所示:
ALT
L-丙氨酸+a-酮戊二酸
丙氨酸+L-谷氨酸
LDT
丙同酸+NADH+H
→L-乳酸+NAD+
在上述偶联反应中,L-丙氨酸的氨基在ALT的催化下转移到α-酮戊二酸,生成丙氨酸和
L-谷氨酸。丙氨酸在乳酸脱氢酶(LDH)的催化下使还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)被
氧化生成氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)。NADH在波长340m有特异吸收峰,其被氧
化的速率与血清中ALT的活性成正比。在340m处监测NADH吸光度下降的速率,即可计算出
ALT活性。
三、操作要点及注意事项
(一)试剂组成
IFCC法的ALT测定试剂主要包含三羟甲基氨基甲烷缓冲液(TrIs缓冲液)、NADH、L-丙氨
酸、LDH、α-酮戊二酸和磷酸吡哆醛等。通常采用双试剂系统以避免血清中的游离α-酮酸
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