API鉴定试剂条是实验室独立进行细菌鉴定的一种较好选择，其主要优点是数据库够大，结果相对更为准确。现对使用过程中个人总结的操作经验进行总结分享。
一、定向实验选择试剂条
进行API鉴定之前首先要进行定向实验确定所用试剂条，然后根据定向实验的结果选择合适的试剂条。定向实验分为表型鉴定、革兰氏染色、氧化酶试验、接触酶试验和凝固酶实验。
1.表型鉴定
表型鉴定主要时在固体培养基上进行划线分离然后进行形态学观察，判断目标菌是否为细菌，若为霉菌则不能进行鉴定；其次确定时一种细菌还是多种细菌，如为多种细菌且未实现分离则需要继续划线。以上过程有以下事项需要注意：所用的培养基最好为非选择性培养基，因为表型鉴定的微生物后续都会用到API鉴定实验，如存在选择性成分或指示剂将可能影响API鉴定的准确性；表型鉴定是一个中间过程，不需要特意进行，也不可能忽略，如不经划线直接进行目标菌的API鉴定，可能会出现因不是纯菌落导致结果不准确或因目标菌的活性过低导致API鉴定结果异常；目标菌划线后的培养温度建议与检验时的条件一致，如接种不能成功，建议选择哥伦比亚培养基或巧克力培养基等更好的培养基在35~37℃条件下进行培养；如目标菌为霉菌，建议培养至产生孢子，然后再选择DNA鉴定等有效方式进行鉴定；关于划线的注意事项参见https://www.bopuyun.com/p/114601682499
2.革兰氏染色实验
革兰氏染色使我们微生物检验过程进行微生物鉴定分类的常用方式，初染、媒染、脱色、复染的步骤大家都已烂熟于心，现仅对过程中需要的操作注意事项进行总结。
首先，选择用的载玻片要洁净，所用的接种环要无菌；
是否使用无菌水，建议使用无菌水，但需要说明自来水也就是含有少量微生物的水也是可以使用的，环境中的微生物在没有繁殖的情况下，环境中没有严重的污染则不会影响颜色结果；
接种时的水滴要小，建议其直径在载玻片的四分之一以内，因过大时涂布容易导致涂片区域过大且不宜固定；
接种时的接种量不宜过多，接种环接触水滴可以看到少量浑浊出现即可，涂片宜薄；
初染后注意作用时间，其次冲洗时注意不要直接冲涂片区域，为了快速干燥可以使用滤纸吸去残水；如无法确定冲洗的力度等，可以将载玻片反过来，冲洗涂片的背部区域，然后实现对涂片区域的冲洗；
媒染时除注意初染需要注意的各项外还需要注意确认碘液的有效性，确认其颜色，如染色变浅（未使用变为黄色）则其可能因保存不善已经失效或部分分解；
脱色时有两种方式可以选择，第一种是使用乙醇进行冲洗直至无紫色脱出，此时需要注意及时冲洗；第二种方法是在涂片区域滴加乙醇作用20-30秒，然后立即进行冲洗。两种方法各有优劣，可以通过实验确认个人更喜欢哪种方式，第二种方式不超过30S，多数情况下不会出现异常。
复染同初染的注意事项类似。此时需要强调一点，整个过程中最好是自然晾干，过程中快速过火会加快染色进度，但是需要注意不能烤干，特别是初染和媒染之后，快速过火的标准是过火后载玻片涂片区域仍有水分而不是彻底干燥，需使用余热使其干燥，载玻片不可烫手。
对于纯菌落，如脱色后确定染色结果为革兰氏阳性，个人认为可以不进行进一步染色；
对于不动杆菌，会出现假阳性现象，有时候出现反复多人染色，结果不同时可以考虑是否是纯菌落或是不动杆菌等特别细菌。
二、API鉴定过程中的注意事项
API鉴定过程可以分为挑选菌落、配制菌悬液、接种试剂条、判读结果四步。
1.挑选菌落
首先要选择纯菌落，其次要为新鲜培养物。无其他注意事项。
2配制菌悬液
需要注意接种浓度影响实验结果，浓度的判定可以使用麦氏浊度判定。麦氏浊度与实际微生物含量存在一定关联，一般取决于微生物的大小。
配制的菌悬液一定要分散均匀，建议使用无菌棉签进行菌悬液的混匀，在确认菌悬液的浓度时有两种方式：使用手工比浊管或比浊仪。配制菌悬液时建议采取少量多次的策略，避免一次接种过多导致失败。
3.接种试剂条
注意不要产生气泡，避免底物与菌液反应不彻底，产生气泡排除气泡时注意污染接种滴管；
为避免产生气泡接种滴管要在杯口和管的交界处侧面进行接种，加样时要小心注入，表面呈平面或稍凸，不要凹陷；
注意按照管底部的标识进行接种，如下图所示，横线标识完全厌氧需要接种后加石蜡油隔绝氧气；未做标识的只加满管部；凹槽标识需要加满。
注意接种过程滴管不要接触管中的试剂，避免操作交叉污染；
接种试剂条后按照要求进行孵育，需要注意孵育的条件；
需要特别注意，培养过程失水是常见的异常情况，风干后不能继续判读结果，因此需要加入足够的水；有如下建议：A将试剂条放入收纳盒等密闭容器培养；B在密闭容器内增加湿巾等增加容器内的湿度；C无论怎样操作都需要注意确保培养温度满足要求；D加入的如不能含有大量二氧化碳或其他挥发性物质。
4.结果的判读
解雇的判读分为颜色改变和观察浊度变化，其中颜色改变分为自发的颜色改变和添加显色剂（补充试剂）后判读。
为避免来自空气中的污染源影响结果的准确判读，在培养结束后要先暂时不开盖进行判读；
过程中使用的补充试剂注意恢复室温后使用；
判读时要与阴性管/阳性管进行比较判读结果；
对于无法确定的结果可以使用❓代替；
视觉判读后注意正确转化为数码；
注意最终结果出现后是否要进行补充实验。
以上为今日份小结，个人学识有限，恳请大家多多指教。
