大家在做液相色谱反相系统梯度洗脱时,有时会遇到仪器不进样,也有出峰的情况,这种峰神出鬼没,变幻莫测,像个幽灵一样,所以被称为鬼峰空白峰系统峰
判断是不是鬼峰,可以通过不进样进流动相只运行方法莫名的色谱峰
鬼峰的类型
鬼峰分为三种类型:
第一种,空白出峰,但是保留时间和目标物相距较远不会有干扰
第二种,空白出峰,出峰时间和目标物相近保留时间的标志物定量结果不会产生影响
但是有个特殊情况,乙腈鬼峰吸收
通常我们可以选择调整流动相比例
第三种,空白出峰,对目标物的定性定量有干扰
鬼峰出现原因和解决办法
通常情况下,如果出现鬼峰,首先排查进样小瓶洗针瓶隔垫残留
接下来可以分成两个大方面进行考虑:流动相液相系统
建议大家在碰见鬼峰时先考虑流动相
1流动相问题和解决办法
而针对流动相问题,我们还可以再次一分为二进行判断,是有机相水相
有机相色谱纯混入了杂质。
一般情况下这种问题在更换了新批次的有机相后出现有据可查
同时也提醒各位同学,更换流动相批次之前,记得留下一些前一批次
水相
水相的问题来源于两个方面:水本身添加物
液相色谱的水相建议使用二级以上的纯水
如果怀疑是水相更换水相
如果怀疑是水中的添加物重新配置水相流动相
另外,关于流动相的污染问题,岛津公司流动相杂质捕集小柱
2液相系统问题和解决办法
当流动相的问题被排除之后,我们通常考虑来自液相系统问题导致的鬼峰。那有哪些可能的来源,如何判断和解决呢?
首先,可能是流动相溶剂瓶内的污染和溶剂瓶内流动相过滤头的污染。
判断方式更换或清洗溶剂瓶
去除溶剂瓶内的过滤头
第二,来自进样器的样品残留。
判断方式两通进样针,针座、六通阀转子污染
需要注意的是,在怀疑这些问题之前也要先检查六通阀的连接管线
如果是进样针、针座六通阀转子污染则要进行相关的清洗和更换
第三, 来自色谱柱的样品残留。
判断方式两通或阻尼管
接下来就要清洗色谱柱了,具体怎样清洗和再生,可以看色谱学堂以前的文章。必要时还需要更换新的色谱柱
需要注意的是,因为阻尼管或两通对样品的保留和色谱柱的保留值不同
第四, 来自真空脱气机故障。
判断方式人为地引入一段气泡出口气泡能否变小更换或维修真空脱气机
第五, 泵的单向阀失灵或堵塞。
判断方式泵压力出口管线的流路
如果是单向阀堵塞或失灵,在仪器公司允许的情况下可以超声清洗
第六, 在线过滤器或保护柱有污染物残留。
这种情况可以通过更换在线过滤器和保护柱
第七, 仪器管路污染残留。
液相系统各部件的连接管路以及内部流路众多,仪器管路污染导致的鬼峰较难排查,只有通过排除前面所有的问题来判断。
当确定是管路污染导致的鬼峰问题时,需要清洗系统,更换管路
比较直接的办法是先移除流路中的色谱柱和流通池
清洗液相系统可以先用高比例水相移除缓冲盐有机相
好了,这么多内容大家是不是觉得很繁杂?
本期主要是帮助大家了解解决鬼峰问题的思路,实际遇到鬼峰问题时,可能只需要在流动相上就可以找到原因和解决办法。
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