AccQ·Tag氨基酸分析方法为生物制品、细胞反应监测、生化药、食品、饲料等行业中进行氨基酸分析的经典方法。
结合个人多年使用经验，整理如下：
①通用注意事项：
1 AccQ·TagA 洗脱液、AccQ·Tag UItra 洗脱液 A、AccQ·Tag UItra 洗脱液B、衍生剂、17 种氨基酸标准品均为waters 产品，色氨酸标准品为中检院标准物质。其它为市售相应级别试剂。
2 已配制好的衍生剂在使用前观察是否有析出及变色(变黄或浅绿色)；析出放入 55℃智能恒温加热仪中加热不超过 10 分钟复溶。变色不能继续使用，重新配制衍生剂。加入衍生剂时要在涡旋混合下加入。
3 标准品使用完及时拧紧样品盖避免污染和蒸发并按保存条件放入冰箱保存。
4 样品及标样中衍生剂水解峰（AQM）的峰高不得低于空白中衍生剂水解峰峰高的 80%，若有低于的情况出现，(为样品的浓度过高或强保留非氨基酸成份在
②好的实验习惯
1.系统进样运行前：HPLC 按平衡 60min→样品瓶号→空白→标准品→供试品顺序加载；UPLC 按平衡 30min→平衡色谱柱 10min→平衡色谱柱 10min→选择样品板类型→样品瓶号→空白→标准品→供试品顺序加载。
2.在无检品时设置平衡色谱柱，直至添加检品。
③衍生过程异常诊断
④以下是你不曾注意或不知道的【干货】：
1 AccQ·Tag 及 AccQ·Tag Ultra 试剂将初级氨基酸及次级氨基酸及氨转化为稳定的衍生物，反应结构部位为氨基酸中的氨基。过量的衍生剂将在一分钟内水解生成 6-氨基喹啉（AMQ），双-氨基喹啉脲，是无干扰的副产物，其它的水解物NHS、CO2 对该检测体系无影响。在确保密封的情况下，氨基酸衍生后的脲在室温下稳定保存期为一周（使用未穿孔隔片的样品瓶封存）。
2 洗脱液A、B 的商品浓缩液开启封后室温状态下保存期 3 天，盖紧后在 4℃ 条件下保存期为 1 个月。洗脱液A、B 的稀释应确保充分混合至少 5 分钟，后应尽可能现用现配稀释液，稀释液室温状态最常使用期限为 3 日内。清洗用的各类溶液应按规定浓度配制并避免引入酸类成分，以免腐蚀密封的部件。
3 移液准确是确保样品正确分析的必要条件，移液器须按规定的检查校准周
4 标准物质中的 17 种氨基酸溶液的溶剂为 0.1mol/l 的盐酸，除胱氨酸浓度为 1.25mM（相当于半胱氨酸为 2.5mM）外，其它为 2.5mM。稀释后的标样氨基酸浓度均为 250pmol/μl（胱氨酸 125 pmol/μl，相当于半胱氨酸 250pmol/μl）。样品检测时预期氨基酸总浓度不应超过此浓度。稀释后的标样在-20℃下可存贮不超过一个月；开封后的原始氨基酸标样应转入密封样品瓶，在-20℃下可储存不超过 3 个月，储存期间应防燥及防冻裂。未开封标样在 4℃可保存一年。
5 衍生化的反应在加入 20μl 衍生剂的同时即已开始，通常初级和次级氨基酸的反应时间为数毫秒;同时水解反应也同步开始，水解时间为几十秒钟；为确保样品中的氨基酸的充分反应，加入衍生剂的操作尽可能在涡旋状态下进行， 加入后保持涡旋数秒钟的时间。室温下放置 1 分钟的操作为确保次级氨基酸的反应能够完成。在 55℃加热的目的为促使酪氨酸的次要副产物转化为主要的单一衍生化合物，此反应室温下较为缓慢，半衰期为 1 小时。
6 AccQ·Tag 法氨基酸测定的定量限为 50fmol，色谱柱上的量等于或大于1pmol 时，可以获得最佳定量效果。定量上限由检测器属性决定。衍生化的总体体积推荐为 100μl，为获得最佳的重现性，HPLC 中进样量不超过 10μl，UPLC 进样量不超过 1.5μl；色谱柱上的理想进样体积为 20ng 蛋白质。
7 方法中的衍生化学品需要 pH 值为 8-10 的未质子化胺（衍生剂仅与未质子化的胺及氨反应）。中和酸性样品可确保 pH 维持在可接受的范围内。过于酸性的样品应提前进行适当中和，以避免影响衍生效果，导致检验结果降低。通常， AccQ·Tag 试剂应比可衍生胺的总量过量 2-5 倍摩尔数。
8 若空白或标样的整体峰面积下降，则可能提示进样系统泄露的风险；若末
