1. 不可接受微生物：洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）
1980年，某吸入剂疑似污染洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderiacepacia，B.cepacia），导致数名患者死亡，引起了美国FDA的注意，该菌已经被FDA列为不可接受微生物（可能在药品中繁殖，并对其化学、物理性质产生不利影响，并破坏该药品的功能及疗效的微生物。在药品中存在的数量以及致病性会导致特定给药途径下使用该药品治疗的患者发生感染的微生物）。近40年来，B.cepacia已经成为全球制药行业产品中检出率最高的不可接受微生物之一。在FDA召回的非无菌产品中，洋葱伯克霍尔德菌（B.cepacia）污染是涉及召回次数最多的微生物污染召回事件，在2004-2011年FDA召回事件中的不可接受微生物，占三分之一的污染微生物为洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）。
2. 洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）为什么跟药品过不去？
Bcc为革兰氏阴性杆菌，对营养要求不高，最适合生长温度为30℃，在4℃不生长。药企的水系统可以促进生物膜的生成，也有利于Bcc生长。
制药用水是药物生产中用量最大、应用最广的基础原材料，制药还可能应用到许多植物性原材料，这两个都和Bcc的生态分布重合，可能成为终产品污染Bcc的源头。的Bcc还有强大的代谢能力以至于可能突破常规的防腐体系在终产品中持续存活。
在洋葱伯克霍尔德菌群的那些事（一）中我们知道Bcc对一般健康人不是威胁，药品的使用对象是患者，一般都不是健康人，在药品被Bcc污染时不可避免的引起各种药害事件。
3.制药过程中洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）的控制范围
FDA2017年发布一则通知：相关生产企业请关注水基质产品污染Bcc的风险。因为高水分活度的制剂Bcc污染风险高。
国家药审中心发补意见：涉及“吸入或口服、口服粘膜、皮肤和鼻腔使用的含水制剂”。
进口产品：本品为非灭菌水溶液剂，请说明纯化水与质量标准微生物限度检查项是否对Bcc进行研究控制。若没有，请进行必要的风险苹果，参照USP<60>开展Bcc检查，制定合理的控制策略。
国内注册药品也有类似发补意见。
4. 洋葱伯克霍尔德菌群（Bcc）的检测
4.1概述
该测试用于确定某一种物质或制剂在规定试验条件下，是否存在洋葱伯克霍尔德菌群。用于检查非无菌制剂，特别适用于吸入或口服、口服粘膜、皮肤和鼻腔使用的含水制剂
4.2促生长及适用性测试的菌株
微生物 标准菌株 洋葱伯克霍尔德菌 ATCC BAA-245或LMG16656 铜绿假单胞菌 ATCC9027、NCIMB8626、CIP82.118或NBRC13275
4.3培养基的适用性检查
培养基 特征 试验菌株 抑制性 铜绿假单胞菌 和金黄色葡萄球菌
4.3.1培养基的促生长能力检查
用涂布法（注意接种量0.1~02ml
需要注意的是不同于一般控制菌检查，BCC选择培养基的试验菌种是3种，3种菌均需要进行试验，不是选择其中某一个试验菌即可。其他促生长相关的内容与通常的促生长能力检查无明显不同。其次注意对菌落的形态特征进行观察。
4.3.2培养基的指示特性检查
操作同促生长能力检查，需要注意的是USP相关内容，除了要求对比菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等，还提到回收率要满足要求。
4.3.3培养基的抑制能力检查
接种不少于100cfu的试验菌与被检培养基和对照培养基中，在30~35℃不少于72h下培养，试验菌不得生长。
需要注意试验菌有两种。
4.4供试品检查
4.5.1供试液准备和增菌培养
制备1：10供试液，取相当于1g或1ml供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30~35℃培养48~72h。
4.5.2选择和分离培养
取上述培养物划线接种于BCSA培养基（Burkholderia cepacia
4.5.2结果解释
洋葱伯克霍尔德菌可能存在的指示特征为周围黄色的绿棕色菌落，或者周围粉红色的白色菌落。挑选可疑菌进行鉴定（应鉴定菌群水平
USP相关原文：
The possible presence of Bcc isindicated by the growth of greenish–brown）colonies with yellow halos, or whitecolonies surrounded by a pink–red zone on BCSA. Any growth on BCSAis confirmed by identification tests. See Microbial Characterization,Identification,and Strain Typing <1113> for additional information.
The product complies with the test if colonies of the types described arenot present or if the confirmatory identification testsare negative.
4.6结语
以上是个人近期洋葱伯克霍尔德菌群相关学习的小结。虽然现在只是2021年，但是药检所的老师已经对洋葱伯克霍尔德菌的检验进行了培训分享，在不久的将来2025年版《中国药典》可能就会增加相关规定。其次在不可接受微生物关注度持续提高的当下，作为一个微生物检验技术人员，我们不仅要做到满足法规的要求，我们还需要对自己要检验的产品有更多的了解，结合其给药方式、适用人群等信息确认是否需要控制某些不可接受微生物。
